Перед использованием конической центрифужной трубки вы должны убедиться, что трубка может противостоять давлению, необходимому во время центрифугирования. Чтобы предотвратить смешивание, важно определить уровень заполнения и избежать смещения крышки во время использования.
Для применения клеточной культуры используются стерильные конические центрифужные трубки. Этот тип трубки имеет высокопрочный процесс производства и предназначен для обеспечения большей стабильности температуры. Чтобы подготовить коническую центрифужную трубку, выполните шаги, изложенные ниже.
Добавьте правильный объем средств массовой информации градиента плотности в каждую стерильную коническую центрифужную трубку. Градиент плотности среда доступен в различных средах, включая сбалансированный солевой раствор Hanks (HBSS) и PBS. Оба являются физиологическими растворами и не содержат кальция или магния. Однако HBSS подходит, потому что он менее кислый, чем PBS.
Затем разбавьте кровь и исходную среду разделения WDR. После разведения перенесите образец в стерильную коническую центрифужную трубку. Если кровь не разбавлена, плазма будет появляться ниже слоя градиента плотности и может быть трудно разделить. Альтернативно, если вся плазма разбавлена, PBMC могут быть отделены от плазмы.
Наконец, объедините пальто Баффи и фаговые полосы в одну 50 мл конической центрифужной трубки. Забегайте трубку PTID и инициалами техника. После того, как образец был повторно зацентирован, удалите фаг-полосы и отбросьте супернатант.
Чтобы поддерживать целостность образца, рекомендуется следовать протоколу для реагентов, такого как метод подложки. Этот метод основан на гравитационной силе между двумя слоями и создает агрегаты. Другие методы, такие как ручное наложение, также доступны.
Чтобы свести к минимуму возможность смешивания, рекомендуется пипетировать начальную кровавую трубку на вершине среда градиента плотности. Кровь и раствор среда среды, градиент плотности, должны медленно и аккуратно пипетировать.
Если коническая центрифужная трубка не может справиться с давлением образца, вы можете использовать повторную центрифужную трубку. Убедитесь, что повторная центрифужная трубка является стерильной и может противостоять давлению. Он должен сохранить перецентрифужную трубку при комнатной температуре между использованием. В качестве альтернативы, пробирку повторной центрифуги может храниться при низкой температуре. Во время цикла замораживания оттаивания перезаточная центрифуга должна быть на уровне от 2 до 8DEGC.
Когда кровь была разбавлена, вы можете добавить в нее WDR, чтобы увеличить его объем. Вы также можете аликвовать разбавление в стерильные конические пробирки центрифуги. Добавьте 0,1 мл WDR на каждые 10 мл крови.
Кроме того, PTID следует отметить на всех полученных трубках крови. Использование идентификатора PTID поможет минимизировать любое перекрестное загрязнение. Кроме того, вы можете отметить каждый PTID разными цветовыми маркерами, чтобы избежать путаницы.
Центрифужная трубка Вариант № | Модель | RCF | Стерилизация | Нижний | Спецификация пакета |
3030001 | 15 мл | 12000xg | Да | Конус дно | 50/сумка, 10 сумков/корпус |
3030002 | 15 мл | 12000xg | Да | Конус дно | 50/пенопластовая стойка, 10 -й корпус |
3031001 | 50 мл | 12000xg | Да | Конус дно | 25/сумка, 20 сумков/корпус |
3031002 | 50 мл | 12000xg | Да | Конус дно | 25/пенопластовая стойка, 20Racks/case3 |