Перед использованием конической центрифужной пробирки необходимо убедиться, что пробирка выдерживает давление, необходимое во время центрифугирования. Чтобы избежать путаницы, важно определять уровень наполнения и не смещать крышку во время использования.
Для культивирования клеток используются стерильные конические центрифужные пробирки. Этот тип трубок имеет высокопрочный производственный процесс и предназначен для обеспечения большей температурной стабильности. Чтобы подготовить коническую центрифужную пробирку, выполните действия, описанные ниже.
Добавьте правильный объем среды с градиентом плотности в каждую стерильную коническую центрифужную пробирку. Среды с градиентом плотности доступны в различных средах, включая сбалансированный солевой раствор Хэнкса (HBSS) и PBS. Оба представляют собой солевые растворы и не содержат кальция и магния. Однако HBSS подходит, поскольку он менее кислый, чем PBS.
Затем разбавьте кровь и начальную разделительную среду WDR. После разведения перенесите образец в стерильную коническую центрифужную пробирку. Если кровь не разбавлена, плазма появится ниже слоя градиента плотности, и ее будет трудно отделить. Альтернативно, если вся плазма разбавлена, РВМС можно отделить от плазмы.
Наконец, объедините лейкоциты и фаговые полосы в одну коническую центрифужную пробирку объемом 50 мл. Нанесите на пробирку PTID и инициалы техника. После повторного центрифугирования образца удалите фаговые полосы и выбросьте супернатант.
Чтобы сохранить целостность образца, рекомендуется следовать протоколу для реагентов, например, методу нижнего слоя. Этот метод основан на силе гравитации между двумя слоями и создает агрегаты. Также доступны другие методы, такие как наложение вручную.
Чтобы свести к минимуму возможность смешивания, рекомендуется пипетировать исходную пробирку с кровью поверх среды с градиентом плотности. Кровь и раствор среды с градиентом плотности следует набирать пипеткой медленно и осторожно.
Если коническая центрифужная пробирка не выдерживает давления образца, можно использовать пробирку для повторной центрифуги. Убедитесь, что пробирка для повторной центрифуги стерильна и выдерживает давление. Между использованиями пробирку для повторного центрифугирования необходимо хранить при комнатной температуре. Альтернативно, пробирку для повторной центрифуги можно хранить при низкой температуре. Во время цикла замораживания-оттаивания температура повторной центрифуги должна находиться в диапазоне от 2 до 8 градусов Цельсия.
Когда кровь разбавлена, вы можете добавить к ней WDR, чтобы увеличить ее объем. Вы также можете аликвотировать раствор в стерильные конические центрифужные пробирки. Добавьте 0,1 мл WDR на каждые 10 мл крови.
Кроме того, на всех полученных пробирках с кровью следует указывать PTID. Использование идентификатора PTID поможет свести к минимуму любое перекрестное загрязнение. Кроме того, во избежание путаницы вы можете пометить каждый PTID маркерами разного цвета.
Центрифужные пробирки Вариант №. | Модель | РШФ | Стерилизация | Нижний | Спецификация упаковки |
3030001 | 15мл | 12000xg | Да | Конусное дно | 50/мешок, 10 мешков/футляр |
3030002 | 15мл | 12000xg | Да | Конусное дно | 50/стойка из пенопласта, 10 стоек/корпус |
3031001 | 50мл | 12000xg | Да | Конусное дно | 25/мешок, 20 мешков/футляр |
3031002 | 50мл | 12000xg | Да | Конусное дно | 25/пенопластовая стойка, 20 стоек/корпус |